改进抗体药物选择性和安全性的抗体锁
Fig.1 Schematic of pro-antibody selectively activated at the disease region by installing a protease-cleavable Ab lock.
①基于空间位阻设计的抗体锁类型包括以自身铰链区作为“屏蔽域”如Infliximab抗体(图2),用自体的IgG1铰链区构建抗体锁,覆盖在抗原结合部位,连接金属蛋白酶(MMP)底物肽构成pro-Ab,当这种抗体在炎症部位遇到蛋白酶MMP,底物的连接链被水解,抗体锁打开,特异性的中和疾病部位的抗原,阻止内风湿性关节炎的进展。 这种设计具有应用广泛、减少免疫原性、减少抗独特型抗体对抗体药物的结合及中和等优点。②以卷曲螺旋域作为“屏蔽域”如Rituximab、Trastuzumab等抗体(图3),用富含亮氨酸和平行异二聚体的卷曲螺旋构成抗体锁,连接MMP底物肽形成pro-Ab,到达炎症部位,螺旋域解离,抗体中和靶抗原。这种螺旋域可以来自新设计的或天然的人蛋白质,这种设计具有应用广泛、较好的屏蔽效果和高效的释放效率等优点,但是相对复杂的结构和定制的突变螺旋导致产量减少,长期使用增加了免疫原性诱导的风险。③以非抗体蛋白片段作为“屏蔽域”,如Cetuximab、Infliximab抗体以TGF-β潜伏相关肽(LAP)通过MMP-2的底物连接链连接在抗体重链的N末端,屏蔽抗原结合位点,减少抗-EGFR Ab 和 抗-TNF-α Ab的结合能力,当被致病部位的MMP-2酶解连接链之后,抗原结合能力重新恢复(图4)。这种方法减少了宿主的免疫原性,因LAP域没有其他的生物学功能,减少了副作用或交叉反应,但是屏蔽效率较差,产量低,限制了的进一步研究和应用。
Fig.3 The coiled-coil domain as a universal Ab lock for enhancing the selectivity of Ab drugs to the disease site.
Fig.4 Endogenous LAP peptide is a widely applied Ab lock for enhancing the selectivity of Ab drugs to the disease site
1.以抗体片段作为“屏蔽域”,Metz等构建了一种三价双特异性抗体,通过蛋白酶底物肽将一个二硫键稳定性可变区片段(dsFv)连接在抗体1重链的C末端,dsFv可以结合c-Met抗原,但是它的抗原结合能力被抗体1的Fc端阻挡,只有被蛋白酶水解才能恢复抗原结合能力(图5a)。Onuoha’s 和Pai’s团队构建了一种可激活的双可变域抗体(aDVD),将来自抗ICAM-1 或抗-PSCA 的dsFv通过MMP-1或MT-SP1酶底物肽连接到另一抗体(Infliximab 或 Adalimumab)的轻链和重链的N末端,dsFv掩盖了内部抗体与抗原的结合,当aDVD到达疾病部位,被酶切活化,恢复内部抗体中和抗原的能力(图5b)。
Fig.5 Ab fragment as an Ab lock for shielding antigen binding ability of specific Ab drugs.
2. 基于亲和肽设计的抗体锁①亲和肽 CytomX公司将从噬菌体抗体库筛选的亲和肽通过底物肽连接在抗体的抗原结合部位,掩蔽抗体(抗-EGFR , 抗-VCAM-1 或 抗-EGFR ADC抗体)的抗原结合活性,制备了ProAb,当到达蛋白酶丰富的微环境时,酶解底物肽,恢复活性(图6)。然而由于亲和性限制了肽从Pro-Ab的释放效率,以及肽的异源性增加了免疫反应的危险性,这种定制肽也限制了它的广泛应用。②交叉隐蔽抗体
Fig. 6 Affinity peptide-based Ab lock for masking the antigen binding activity of Ab drugs
Fig.7 Cross-masking antibodies for limiting off-target effects of Ab drugs.
Fig.8 Bivalent peptide-double strand DNA (dsDNA) conjugates as affinity-based Ab lock for blocking antigen binding ability of Ab drugs.
比较了Pro-Abs的不同屏蔽策略(表3),基于空间位阻设计的抗体锁如自体铰链区、卷曲螺旋域、LAP域或抗体片段,具有屏蔽效果好,释放效率高、抗体活性恢复好,应用广泛等优点。基于亲和性策略设计的抗体锁如亲和肽或突变抗原,具有可接受的屏蔽效率,但是需要定制屏蔽肽和不确定的释放效率使其不适合临床应用。用人造的卷曲螺旋域、外来的抗体片段及突变抗原等制备的抗体锁因免疫原性具有一定危险性。本质上,这两种策略都能阻止抗同种异型抗体的中和和清除。总之,不同屏蔽策略具有不同的优势,为研制针对不同疾病的下一代抗体药提供选择。
Pro-Ab除了能够针对性治疗外,还可以避免抗同种异型抗体的中和及清除作用,但不同的抗体锁具有不同的屏蔽效率,同一抗体锁安装在不同抗体上屏蔽效率也不同,可通过计算机模拟技术进一步改善Pro-Ab的屏蔽效果。